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口腔種植修復(fù)是當(dāng)前修復(fù)失牙的首選方法[1]。口腔種植修復(fù)成功的關(guān)鍵在于術(shù)后獲得良好的種植體-骨界面，即骨結(jié)合[2]。骨質(zhì)疏松是一種全身性骨量減少的疾病[3]，主要表現(xiàn)為骨組織微結(jié)構(gòu)遭到破壞，骨量減少，破骨的速度遠(yuǎn)大于骨形成速度[4]，我國骨質(zhì)疏松位于慢性病第 3 位[5]。多數(shù)研究[6]認(rèn)為因雌激素水平下降，卵巢功能減退，女性患病率遠(yuǎn)高于男性。為了提高女性患者種植牙的成功率，有必要對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松狀態(tài)下的種植體植入進(jìn)行深入研究。葛根異黃酮是中藥葛根的主要有效成分，研究[7]表明葛根異黃酮可以增加骨密度，促進(jìn)骨礦化，具有一定的植物雌激素效應(yīng)，多用于防治骨質(zhì)疏松癥。而葛根異黃酮對(duì)骨質(zhì)疏松狀態(tài)下種植體周圍骨結(jié)合影響的相關(guān)報(bào)道還十分罕見。

1.1儀器與材料 

純鈦種植體(長(zhǎng) 5 mm，直徑 2 mm，螺距 0.8 mm，九州生物有限公司)；葛根異黃酮 80%(陜西森弗生物科技有限公司)；Micro-CT 機(jī)(Siemens，德國)；光固化包埋機(jī)(EXAKT，德國)；硬組織切片機(jī)(EXAKT，德國)；硬組織磨片機(jī)(BROT-LAB，法國)；江南 XD-202 倒置生物光學(xué)顯微鏡(南京江南永新光學(xué)有限公司)；Image-Pro Plus6.0 圖像分析軟件。

1.2方法

1.2.1 骨質(zhì)疏松模型建立及分組

36 只 3 月齡、雌性 SPF 級(jí) SD 大鼠(大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，動(dòng)物倫理編號(hào)：2018073。隨機(jī)抽取 6 只為正常組；6 只為假手術(shù)組，行雙側(cè)卵巢周圍等量脂肪摘除術(shù)；剩余24 只行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)(卵巢摘除組)，術(shù)后連續(xù) 5 d觀察陰道分泌物涂片，術(shù)后 3 個(gè)月正常組、假手術(shù)組、卵巢摘除組各隨機(jī)選取 3 只全麻下 Micro-CT 觀察。確定模型建立成功后，將卵巢摘除組隨機(jī)分為模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組 6 只。

1.2.2 種植體植入 

術(shù)前全麻，于雙側(cè)脛骨近心端內(nèi)側(cè)行 1 cm 的縱行切口，鈍性分離，暴露骨面，用牙科打磨機(jī)，轉(zhuǎn)速<600 r/min 擴(kuò)孔，植入直徑 2 mm 長(zhǎng)度 5 mm 的純鈦種植體。

1.2.3 動(dòng)物處理 

術(shù)后即開始每天灌胃，低劑量組予葛根異黃酮水溶液 25 mg/kg，中劑量組予葛根異黃酮水溶液 50 mg/kg，高劑量組予葛根異黃酮水溶液 100 mg/kg，正常組、假手術(shù)組、模型組給予等體積生理鹽水。連續(xù)灌胃 12 周后，處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，取出帶有種植體的脛骨，制備 0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm 大小的組織塊 72 塊。

1.2.4 觀察指標(biāo)

(1)骨質(zhì)疏松模型評(píng)估：卵巢摘除術(shù)后連續(xù) 5 d 進(jìn)行陰道分泌物涂片，均未觀察到動(dòng)情周期。術(shù)后 3 個(gè)月，隨機(jī)取 36 塊組織塊行 MicroCT 拍攝，所得圖像進(jìn)行三維重建，選取種植體周圍0.5 mm 的骨組織為感興趣區(qū)域，分析骨體積分?jǐn)?shù)(bone volume fraction around the implant, BV/TV)，觀察是否達(dá)到骨質(zhì)疏松狀態(tài)。(2)組織切片觀察：隨機(jī)36 塊組織塊，硬組織切片機(jī)延釘子長(zhǎng)軸切割，VanGieson 氏苦味酸-酸性品紅(VG)染色，于倒置顯微鏡鏡下觀察，用 Image-Pro Plus6.0 圖像分析軟件測(cè)量骨接觸率(bone to implant concntact, BIC)，即種植體表面直接接觸的骨長(zhǎng)度占種植體表面總長(zhǎng)度的百分率。(3)最大拉拔力測(cè)試：剩余的 36 塊標(biāo)本以 2 mm/min的速度沿釘子長(zhǎng)軸牽引種植體，以峰值為最大拔出力值。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 

運(yùn)用 SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組間比較采用單因素方差分析，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.1骨質(zhì)疏松模型鑒定 

卵巢摘除術(shù)后 3 個(gè)月，正常組大鼠雙側(cè)脛骨近心端的 BV/TV 與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.511)；模型組 BV/TV 較正常組及假手術(shù)組顯著降低(P<0.001)(表 1)，說明骨質(zhì)疏松造模成功。與模型組比較，低劑量組大鼠感興趣區(qū)域內(nèi)的 BV/TV 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.418)；中、高劑量組感興趣區(qū)域內(nèi)的 BV/TV 顯著增加(P=0.006,P<0.001)(表 1)，表明葛根異黃酮可以促進(jìn)種植體周圍骨的形成。

2.2組織切片觀察 

種植體植入 12 周后，VG 染色示，種植體螺紋周圍均有新骨形成，骨小梁被染成紅色。正常組與假手術(shù)組、低劑量組與模型組骨小梁致密程度無明顯差異；模型組骨小梁較正常組及假手術(shù)組明顯稀疏；中、高劑量組骨小梁較模型組明顯致密(圖 1)。各組 BIC 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=54.290, P<0.001)，正常組與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.522)，模型組顯著低于正常組及假手術(shù)組(P<0.001)，模型組與低劑量組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.250)，中、高劑量組顯著增加(P=0.001, P<0.001)，表明葛根異黃酮可以促進(jìn)種植體周圍骨結(jié)合(表 1)。

2.3各組種植體最大拉拔力

種植體植入 12 周后，各組間最大拉拔力比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=20.015, P<0.001)，正常組與假手術(shù)組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.532)。模型組顯著低于正常組及假手術(shù)組(P<0.001)，低劑量組與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.204)，中、高劑量組種植體拔出力顯著增加(P=0.001，P<0.001)高劑量組與正常組及假手術(shù)組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.867, 0.429)(表 1)。表明葛根異黃酮可以促進(jìn)種植體周圍骨結(jié)合，且高劑量組從力學(xué)角度上看，已經(jīng)達(dá)到和正常組一樣的水平。